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發(fā)布時間：2025-03-28 11:23:19
上期我們揭秘了雙熒光素酶的實驗操作（點擊回顧→），本期我們根據(jù)SCI文獻，分享幾篇頂刊案例。
Circ-ZEB1 promotes PIK3CA expression by silencing miR-199a-3p and affects the proliferation and apoptosis of hepatocellular carcinoma
Circ-ZEB1通過沉默miR-199a-3p促進PIK3CA表達并影響肝細胞癌的增殖和凋亡
本文章基于尋找更準確的生物標志物來早期診斷肝癌并改善預(yù)后的目的，通過全基因組測序分析肝癌組織與正常組織中的基因表達差異，并發(fā)現(xiàn)circ-ZEB1和PIK3CA在肝癌組織中高表達，而miR-199a-3p在肝癌組織中表達顯著下調(diào)。同時，細胞功能實驗顯示，下調(diào)circ-ZEB1的表達可以抑制肝癌細胞的增殖并促進細胞凋亡。進一步的研究表明，circ-ZEB1與miR-199a-3p、miR-199a-3p與PIK3CA具有靶向關(guān)系，且circ-ZEB1可以通過沉默miR-199a-3p來促進PIK3CA的表達，從而影響肝癌細胞的增殖和凋亡。circ-ZEB1和PIK3CA的高表達與肝細胞癌的預(yù)后不良有關(guān)，提示它們可以作為肝癌診斷和治療的潛在生物標志物，即通過沉默circ-ZEB1或上調(diào)miR-199a-3p來抑制PIK3CA的表達，從而減緩肝癌的進程。
本文采用FISH和雙熒光素酶實驗驗證了circ-ZEB1與miR-199a-3p、miR-199a-3p與PIK3CA之間的靶向關(guān)系：
①miR-199a-3p在肝癌組織中表達顯著下調(diào)且circ-ZEB1與miR-199a-3p具有靶向關(guān)系；
②miR-199a-3p與PIK3CA具有靶向關(guān)系，且circ-ZEB1可以通過競爭吸附miR-199a-3p來促進PIK3CA的表達，從而影響肝癌細胞的增殖和凋亡。
Long non-coding RNA linc00673 Regulates Non-Small Cell Lung Cancer Proliferation, Migration, Invasion, and Epithelial-Mesenchymal Transition by Sponging miR-150-5p
長鏈非編碼 RNA linc00673 通過吸附 miR-150-5p 調(diào)控非小細胞肺癌增殖、遷移、侵襲和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化
linc00673是致癌還是抑癌以及是否調(diào)節(jié)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化尚未明確，本文旨在探討linc00673在非小細胞肺癌（NSCLC）中的作用及其機制。研究發(fā)現(xiàn)，linc00673通過作為競爭性內(nèi)源RNA（ceRNA）吸附miR-150-5p，進而調(diào)控ZEB1表達，影響NSCLC細胞的增殖、遷移、侵襲和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）。
本文利用雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)，將linc00673、ZEB1構(gòu)建在pmirGLO載體上，證實了linc00673、ZEB1與miR-150-5p具有靶向關(guān)系；選擇miR-150-5p作為研究，是通過miRanda預(yù)測結(jié)果結(jié)合TCGA（The Cancer Genome Atlas，癌癥基因組圖譜計劃）的數(shù)據(jù)，選擇得分最高且已被證明通過調(diào)節(jié)ZEB1參與調(diào)節(jié)EMT過程的miR-150-5p；本文中，linc00673有致癌趨勢。
circRIP2 accelerates bladder cancer progression via miR-1305/Tgf-β2/smad3 pathway
circRIP2 通過 miR-1305/Tgf-β2/smad3 通路加速膀胱癌進展
本文主要研究了circRIP2在膀胱癌中的表達模式及其通過miR-1305/Tgf-β2/smad3通路促進膀胱癌進展的機制。通過雙熒光素酶實驗證明circRIP2與miR-1305與Tgf-β2基因間的調(diào)控關(guān)系，為闡明機制奠定基礎(chǔ)。
ZNF460-mediated circRPPH1 promotes TNBC progression through ITGA5-induced FAK/PI3K/AKT activation in a ceRNA manner
ZNF460 介導(dǎo)的 circRPPH1 通過 ITGA5 誘導(dǎo)的 FAK/PI3K/AKT 激活以 ceRNA 方式促進 TNBC 進展
乳腺癌是女性中最常見的惡性腫瘤之一，其中三陰性乳腺癌（TNBC）由于缺乏雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）和人表皮生長因子受體2（HER2）的表達，對內(nèi)分泌治療和抗HER2靶向治療不敏感，化療仍是其主要治療手段。然而，TNBC易發(fā)生淋巴結(jié)和遠處轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差。因此，探索TNBC新的治療靶點具有重要意義。本研究旨在篩選在TNBC組織和正常乳腺組織中表達差異顯著的環(huán)狀RNA（circRNA），并驗證其在TNBC中的生物學(xué)作用及相關(guān)機制。通過RNA測序數(shù)據(jù)分析篩選出表達差異顯著的circRPPH1，雙熒光素酶報告基因?qū)嶒烌炞C了circRPPH1與ZNF460、miR-326及ITGA5之間的調(diào)控關(guān)系。
ZNF460能夠促進circRPPH1的表達，circRPPH1可作為miR-326的分子海綿，抑制其對ITGA5的降解，從而激活FAK/PI3K/AKT通路，促進TNBC的進展。
華聯(lián)科擁有成熟的雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)和實驗平臺，為您提供量身定制一整套相關(guān)技術(shù)服務(wù)。
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穩(wěn)定性強：熒光素酶一旦翻譯產(chǎn)生即具有報告活性，且不易降解；
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特異性強：細胞內(nèi)無內(nèi)源性熒光素酶表達，避免了其他因素的干擾；
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無交叉干擾：兩種熒光素酶反應(yīng)底物互不干擾，確保了實驗結(jié)果的準確性；
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靈敏度高，比 Western blot 靈敏度高 1000 倍以上；
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應(yīng)用范圍廣泛；
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檢測方便、周期較短；
序列評估、靶點預(yù)測→基因合成及載體構(gòu)建→質(zhì)粒提取→細胞轉(zhuǎn)染→雙熒光素酶檢測→數(shù)據(jù)分析
基因：提供詳細的轉(zhuǎn)錄因子、目的基因、或 microRNA 信息；
細胞：無特殊需求，默認使用 293T 細胞，則無需提供；
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